DNA重組技術(shù)的基本工具：
1、基因工程的概念：
2、基本工具：
�。�1）“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）
�、賮碓矗褐饕菑脑松镏蟹蛛x純化出來的。
�、诠δ埽耗軌蜃R(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。
③結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。
即 當(dāng)限制性內(nèi)切酶作用于特定的DNA時(shí)，把這段序列沿著特定的切點(diǎn)切開的這個(gè)過程分兩種情況：
a、沿著中軸線切口（即沿著DNA雙鏈中對(duì)應(yīng)的磷酸二酯鍵）切開，得到的就是兩個(gè)平末端；
b、在中軸線的兩端切口切開，得到的就是兩個(gè)黏性末端。例如：EcoRⅠ限制性內(nèi)切酶就可以識(shí)別G/AATTC的DNA序列，然后在G和A間切開，得到的就是兩個(gè)黏性末端（之間可以根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則重組）限制酶的切口不都是一長(zhǎng)一短的，一長(zhǎng)一短的叫黏性末端，一樣長(zhǎng)的叫平末端�！罢承阅┒恕痹诟咧薪滩闹幸沧鳌梆ば阅┒恕�。如圖：
（2）“分子縫合針”——DNA連接酶
�。�3）“分子運(yùn)輸車”——載體
�、佥d體具備的條件：能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存；具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入；具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。
�、谧畛Ｓ玫妮d體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。
�、燮渌d體：噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒
知識(shí)點(diǎn)撥：
1、限制酶識(shí)別的序列的特點(diǎn)：呈現(xiàn)堿基互補(bǔ)對(duì)稱，無(wú)論是奇數(shù)個(gè)堿基還是偶數(shù)個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線，如圖，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。如
以中心線為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱；
以
為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱。
2、獲取目的基因和切割載體時(shí)使用同種限制酶，目的是產(chǎn)生相同的黏性末端。
3、獲取一個(gè)目的基因需限制酶剪切兩次，共產(chǎn)生 4個(gè)黏性末端或平末端。
4、限制酶切割位點(diǎn)的選擇必須保證標(biāo)記基因的完整性，以便于檢測(cè)。