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多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段

更新時(shí)間:2016/8/23 13:56:00  手機(jī)版

  多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段:

  1、PCR原理:在解旋酶作用下,打開(kāi)DNA雙鏈,每條DNA單鏈作為母鏈,以4中游離脫氧核苷酸為原料,合成子鏈,在引物作用下,DNA聚合酶從引物3'端開(kāi)始延伸DNA鏈,即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)程。DNA的復(fù)制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。

  2、PCR反應(yīng)過(guò)程是:變性→復(fù)性→延伸

  3、結(jié)果:上述三步反應(yīng)完成后,一個(gè)DNA分子就變成了兩個(gè)DNA分子,隨著重復(fù)次數(shù)的增多,DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反應(yīng)過(guò)程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的。

  細(xì)胞被DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較:

  知識(shí)點(diǎn)撥:

  1、DNA分子復(fù)制的人工控制

  解開(kāi)螺旋:在80~100℃時(shí),DNA雙螺旋打開(kāi),形成兩條DNA單鏈,稱(chēng)為變性。

  恢復(fù)螺旋:在50~60℃左右時(shí),兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu),稱(chēng)為復(fù)性。

  復(fù)制條件:緩沖液,DNA模板、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種引物。

  控制儀器:PCR儀(溫度周期性自動(dòng)調(diào)節(jié)儀)。

  2、PCR的含義是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。

  3、PCR技術(shù)反應(yīng)的條件:①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境;②DNA模板;③合成引物;④四種脫氧核甘酸;⑤DNA聚合酶;⑥溫控設(shè)備

  4、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是快速、高效、靈活、易于操作。

  5、TaqDNA聚合酶的特點(diǎn)是:耐高溫。

  知識(shí)拓展:

  1、DNA含量的測(cè)定——分光光度法

  2、DNA聚合酶不恩能夠從頭合成DNA,只能從DNA的3'端開(kāi)始延伸DNA鏈,因此DNA復(fù)制需要引物。

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